技术需求背景：

调节性T细胞（Treg细胞）在移植以及自身免疫性疾病中的临床应用价值较高。脐血来源方便，脐血中CD4⁺CD25⁺Treg细胞数量高、体外刺激培养后免疫抑制能力更强、 体外扩增获得的UCB Treg细胞在体内存活率高。 因此UCB 来源Treg细胞较外周血来源Treg细胞临床应用价值更高。本公司旨在充分利用丰富的脐带血资源，摸索体外高效扩增CD4⁺CD25⁺Tregs细胞的方法，获得满足临床输注需求的CD4⁺CD25⁺Tregs。

预期目标：

通过添加白细胞介素、anti-CD3,anti-CD28等刺激因子刺激脐带血TNC细胞中Treg细胞高效扩增，最终获得纯度高达90%以上的Treg细胞，且细胞数目达到临床输注需求（>4×10⁸）。

面临的技术难点与困难：

1.  脐带血全部有核细胞进行培养，添加IL-2，anti-CD28抗体，将细胞铺至anti-CD3抗体的培养皿中，刺激共14d后，Treg的扩增倍数仅在300倍，最终Treg数目为1.4×10⁸，且纯度不足60%。如何提高扩增过程中Treg比例？

2.  使用磁珠分选法自脐带血中分选获得高纯度Treg细胞后，进行扩增，扩增倍数仅能达到几十倍。如何提高纯化后Treg细胞的扩增？

希望达到的主要关键指标：